ST-2000A霉菌毒素测定仪是当前黄曲毒素、酶联免疫等分析必备的一种分析仪器。采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理，即酶联免疫法，由本仪器与B1试剂盒二大件组成，能限量、定量测定样品中黄曲霉毒素B1的含量(如配其他试剂盒，可测其他毒素)，广泛应用于粮食、食品、饲料、油脂、乳制品、药物、饮料、酒等产品的黄曲霉毒素B1及其他霉菌毒素的检测。

性能特点：

1、显示操作：彩色液晶屏、可视话布板、显示整板信息、触摸屏操作

2、振板功能：3 级振板速度、时间 0-255 秒可调

3、工 作 站：专业的酶标仪软件，可存储 500 组程序、100000 个 样本结果，提供吸光度、线性方程、对数方程、二次方程、三次方程、吸光度百分比-浓度对数方程、样条函数、抑制率等丰富的计算模式

技术参数：

光 源：DC12V  22W 进口卤素灯

波长范围：400-900nm

滤 光 片：标配 405、450、492、630nm，其它波长可选配

读数范围：0-4.000Abs

分 辨 率：0.001Abs

示值误差：≤±0.01Abs

稳 定 性：≤±0.003Abs

重 复 性：≤0.3%

尺寸：400mm(L)*260mm(W)*200mm(H)

1 原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测谷物、饲料等样品中的黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的黄曲霉毒素B1和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素B1抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素B1含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中黄曲霉毒素B1的残留量。

2 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：0.03ppb(ng/ml)

2.2 反应模式：25℃，30min～15min

2.3 检测下限：

谷物……………………………………0.15ppb

配合饲料………………………………0.3ppb

食用油、花生…………………………0.6ppb

酱类、麦类等饲料……………………0.3ppb

啤酒……………………………………0.3ppb

葡萄酒、酱油、醋……………………0.15ppb

2.4 交叉反应率：

黄曲霉毒素B1…………………………100%

2.5 样本回收率：

谷物及配合饲料……………………85%±15%

花生…………………………………82±15%

食用油………………………………85±15%

酱类、麦类等饲料………………83±15%

啤酒………………………………84±15%

葡萄酒、酱油、醋………………87±15%

3 试剂盒组成

酶标板……………………………96孔

标准液（黑盖）：各1ml

0ppb、0.03ppb、0.06ppb、0.12ppb、0.24ppb、0.48ppb

高标准液：100ppb…………………1ml

酶标记物（红盖）…………………5.5ml

抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml

底物液A（白盖）……………………6ml

底物液B（黑盖）……………………6ml

终止液（黄盖）………………………6ml

20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml

说明书………………………………1份

4 需要的器材和试剂

4.1 仪器：黄曲霉素测定仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 试剂：甲醇、正己烷、三氯甲烷或二氯甲烷

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液：

配液1：样品提取液

70%甲醇，即V甲醇:V去离子水=7：3。

5.3 样本前处理步骤：

5.3.1 谷物处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加5ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：5 检测下限：0.15ppb

5.3.2 玉米皮、麦麸等吸水性强的样本处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加20ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；（对于毒素含量极高的样本可用35%的甲醇稀释后再测。比如取2）中的混合液0.1ml加35%的甲醇0.9ml混匀，最终样本稀释倍数为200，检测下限为6ppb。）

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：20    检测下限：0.6ppb

注：由于毒素在样本中的分布呈非均匀状态，取样时需多点取样充分混匀后再取2g进行试验。

5.3.3 配合饲料处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：10 检测下限：0.3ppb

5.3.4 食用油、花生、高油脂的饲料处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加8ml正己烷和10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）去除上层液体，取0.5ml下层液体加入0.5ml去离子水，混匀，再取混匀液体0.5ml加入0.5ml 35%甲醇，振荡30S；

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：20    检测下限：0.6ppb

5.3.5 酱类、麦类、饼干、糕点等食品或调料，以及饲料浓缩料等饲料处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取2ml上清，加入4ml三氯甲烷（或二氯甲烷），振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

3）转移上层液体到另一容器中，下层液留置备用，向上层液中再加入4ml三氯甲烷（或二氯甲烷），充分振荡混5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

4）去除上层液体，合并两次的下层液体并充分混匀；

5）取合并后的下层液体2ml于50-60℃氮气下吹干；

6）加入0.5ml样品提取液充分溶解干燥物，再加入0.5ml去离子水混匀；

7）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：10    检测下限：0.3ppb

5.3.6 啤酒处理方法

1）将啤酒充分搅拌（去除CO2），取2ml啤酒样品，加入1ml蒸馏水，再加入7ml甲醇，振荡5分钟；

2）取混匀后的样品液0.5ml加入0.5ml去离子水，混匀；

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：10    检测下限：0.3ppb

5.3.7 葡萄酒、酱油、醋处理方法

1）取2ml样品，加入2ml蒸馏水，再加入10ml三氯甲烷（或二氯甲烷），振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取下层液体1ml于50-60℃氮气下吹干；

3）加入0.5ml样品提取液充分溶解干燥物，再加入0.5ml去离子水，混匀；

5）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：5    检测下限：0.15ppb

6 酶联免疫试验步骤

将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

实验开始前，用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。

6.1 编 号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

6.2 加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。

6.3 洗 涤：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

6.4 显 色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。

6.5 终 止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。

6.6 测吸光值：用黄曲霉素测定仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成

6.7 ST-2000A自动黄曲霉素测定仪自动完成测定，自动出结果。